Lehrende/r: Prof. Dr. Ursula Kurzik-Dumke
Veranstaltungsart: Praktikum
Anzeige im Stundenplan: F II/Genetik Regulat
Semesterwochenstunden: 14
Credits: 14,0
Unterrichtssprache: Deutsch
Min. | Max. Teilnehmerzahl: - | 2
Voraussetzungen / Organisatorisches: Beginn nach Absprache; 6 Wochen, ganztägig; Ort: Verfügungsgebäude für Forschung & Entwicklung, Obere Zahlbacher Str. 63; Anmeldung: persönliche Anmeldung; Telefon: 17-9221; E-Mail: kurzik@uni-mainz.de Weiteres: Laborpraktikum; Blockpraktikum; Individuelle Betreuung; Erlernen von ausgewählten experimentellen Methoden und Verfahren (s. Inhalt) im Rahmen von laufenden Forschungsprojekten zur Aufklärung der zellulären Rolle und zellspezifischen Regulation des tid Tumorsuppressors und weiterer in der AG entdeckten Gene. Die Auswahl der Methodik, die im Rahmen des Praktikums erlernt wird, ist von der konkreten Fragestellung - z.B. Isolierung von molekularen Partner-Proteinen, Identifizierung von zellspezifischen Regulatoren der Transkription, die bearbeitet wird, abhängig.
Inhalt: Umgang mit Plasmid und genomicher DNA (Bakterien, Hefe, Maus, Mensch): Isolierung, Reinigung, Restriktion, Auftrennung, Amplifikation definierter Fragmente mittels PCR, Southern Blot; Herstellung von Expressionsvektoren: Expression rekombinanter DNA in Bakterien-, Hefe und Eukaryoten-Zellen; Herstellung von cDNA-Banken; Sequenzierung; Sequenzanalyse; Umgang mit Proteinen: Herstellung rekombinanter Proteine in Bakterien, Reinigung rekombinanter Proteine mit Hilfe der Affinitätschromatographie, Nachweis von Proteinen mit Hilfe spezifischer Antikörper via Western-Blot; In vitro Transkritpion/Translation; Immunopräzipitation von nativen Proteinen/Komplexen aus Gewebe- und Zellexktrakten; Protein-Protein-Bindungsstudien mittels Hefe-Di-Hybrid Technik und in vitro pull down Assays; DNA-Protein-Bindungsstudien via Hefe One-Hybrid Technik und mittels Chromatin-Immunopräzipitation; Bestimmung der Antikörperkonzentration im Serum mit Hilfe von ELISA; Kultivierung humaner Zellen (Passagieren von Zellen, Vitalitätstests,Transfektion); Immunhistochemie: in situ Detektion von Proteinen mit Hilfe spezifischer Antikörper.
